污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一。

一、污染的清除

培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染，多數(shù)較難處理。如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，宜棄之。有細(xì)胞株留存的或可購(gòu)置的，可在尋找原因后徹底消毒操作室，復(fù)蘇或重新購(gòu)置細(xì)胞，再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價(jià)值較大，又難干重新得到，可采取以下辦法清除。

1.使用抗生素

抗生素對(duì)殺滅細(xì)菌較有效，聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好，預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。

預(yù)防用藥一般用雙抗牛素(青霉素100u/ml加鏈霉素100ug/mL)，污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法，于加藥后作用24~48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。

所用抗生素品種除青霉素、鏈霉素外，還可用慶大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制霉菌素等。常用400~800ua/ml卡那霉素或200ua/ml四環(huán)素外理，每隔2~3日換液1次，傳1~2代進(jìn)行治療。

2.加溫處理

將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，可殺死支原體，但對(duì)細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，摸索能最大限度殺死支原體又對(duì)細(xì)胞影響最小的加熱時(shí)間。此法有時(shí)不可靠。若先用藥物處理后，再以41℃加溫處理效果更佳。

3.使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價(jià)1:320以上)可去除支原體污染，因特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性，并且5個(gè)月后仍為陰性。但此法比較麻煩，不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì)

4.其他方法

除了上述去除污染的方法外，還有動(dòng)物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及過(guò)濾法等，但均較麻煩，目效果不確定。所以一日支原體污染，除非有特別重要價(jià)值，一般均棄之重新培養(yǎng)。

二、污染的預(yù)防

預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染的最好辦法。只有預(yù)防工作做在前，才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手。

1.從物品、用品消毒滅菌著手

細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗，消毒要徹底，各種溶液滅菌除菌要仔細(xì)，并在無(wú)菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。

2.從操作者做起

(1)操作者責(zé)任心要強(qiáng)，要細(xì)心穩(wěn)重，操作技術(shù)要熟練。

進(jìn)無(wú)菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘，按規(guī)定穿隔離衣。進(jìn)入后關(guān)好門，坐下來(lái)盡量少走動(dòng)。工作開始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

事先要嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物，不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無(wú)菌室內(nèi)，更不能隨便使用，以免造成大批污染。

(2)操作者動(dòng)作要輕，必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開瓶口，并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。