熱門關(guān)鍵詞: 自動化吸頭 移液器吸頭 PCR管 細胞培養(yǎng)皿
經(jīng)常做細胞實驗的你,想必一定遇到過這個難題:細胞收集,究竟哪種方案最合適?
離心收集or瓶內(nèi)裂解or胰酶消化?今天,跟著小岳一起來了解一下細胞收集方法的優(yōu)劣對比及操作步驟!
1、離心法
優(yōu)點:離心法操作方便,同時我們可根據(jù)收集到的細胞沉淀來加入適量的裂解液,從而能夠控制樣品蛋白的濃度。
缺點:在離心過程中卻容易造成細胞破碎而降低總蛋白得率,同時會造成細胞外基質(zhì)(ECM)的丟失,從而造成樣品蛋白質(zhì)圖譜的不完整。
(注:細胞外基質(zhì)(ECM)是由細胞外大分子和礦物質(zhì)(如膠原蛋白、酶、糖蛋白和羥基磷灰石)組成的三維網(wǎng)絡(luò),為周圍細胞提供結(jié)構(gòu)和生化支持。因為多細胞在不同的多細胞譜系中獨立進化,細胞外基質(zhì)的組成因多細胞結(jié)構(gòu)而異;然而,細胞粘附、細胞間通訊和分化是ECM的常見功能。細胞外基質(zhì)主要由5類物質(zhì)組成,即膠原蛋白、非膠原蛋白、彈性蛋白、蛋白聚糖與氨基聚糖,按分布部位劃分主要分為基底膜(Basement membrane)和間質(zhì)基質(zhì)(Interstitial matrix))
2、瓶內(nèi)裂解法
優(yōu)點:瓶內(nèi)裂解法最大的優(yōu)點是可以有效的防止細胞在離心過程中破碎,能有效的提高總蛋白得率,同時也能完整的保留細胞外基質(zhì)(ECM)。
缺點:操作會相對復(fù)雜,且不易控制加入的裂解液量,往往會造成總蛋白濃度低且粘度高等情況;對于一些藥物處理的細胞和貼壁不牢的細胞,使用此方法在清洗階段也容易造成細胞大量丟失。
3、胰酶消化法
優(yōu)點:胰酶處理的細胞個體形態(tài)單一,不聚團,對細胞損傷小。
缺點:會造成細胞外基質(zhì)(ECM)的完全丟失,同時會剪切一些對胰酶敏感的蛋白。
對于WB蛋白樣品中是否含有對胰酶敏感的蛋白,我們往往不太確定,同時胰蛋白酶也屬于外來蛋白質(zhì),如果不能做到徹底清除,同樣會污染我們的樣本。所以用于WB的細胞樣品不建議使用胰酶消化法收集細胞。
每一種方法都有自己的優(yōu)勢和局限性,我們要根據(jù)自己的細胞類型選擇合適的細胞收集方式。
離心法:適用于懸浮細胞、貼壁不牢和藥物處理過的細胞;
瓶內(nèi)裂解法:適用于所有的貼壁細胞;
胰酶消化法:適用于目的蛋白非細胞外基質(zhì)(ECM)或?qū)σ让覆幻舾械牡鞍住?
在一般情況下,根據(jù)經(jīng)驗會首推瓶內(nèi)裂解法,其次離心法;不推薦胰酶消化法。
【本文標(biāo)簽】 離心管 細胞培養(yǎng)瓶
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