細(xì)胞培養(yǎng)基（cell culture medium）是人工模擬動物細(xì)胞的體內(nèi)生長環(huán)境，維持體外細(xì)胞存活和增殖的營養(yǎng)物質(zhì)基礎(chǔ)，其主要功能是為細(xì)胞提供適宜的pH和滲透壓，以及細(xì)胞本身不能合成的各種營養(yǎng)物質(zhì)。那么細(xì)胞培養(yǎng)基在使用過程中會遇到哪些常見的問題呢？下面我們來做個分析。

1. 細(xì)胞培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)選擇及pH變化問題

由于大多數(shù)細(xì)胞適宜的pH為7.0~7.4，偏離此范圍可能對細(xì)胞生長產(chǎn)生有害的影響。但各種細(xì)胞對pH的要求也不完全相同，原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般對pH變動耐受力差，無限細(xì)胞系耐受力強(qiáng)。因此，原代培養(yǎng)時，培養(yǎng)液中的緩沖系統(tǒng)就顯得較為重要。一般的細(xì)胞培養(yǎng)基采用的都是平衡鹽系統(tǒng)，但不同的培養(yǎng)基或是同一系列的培養(yǎng)基所用平衡鹽系統(tǒng)不同，如199系列、MEM系列均有Hanks’系統(tǒng)的培養(yǎng)基及Earle’s系統(tǒng)的培養(yǎng)基。有些培養(yǎng)基不是上述常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，例如RPMI1640培養(yǎng)基、F12培養(yǎng)基。MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。

細(xì)胞培養(yǎng)過程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細(xì)胞生長非?？鞎r，pH值通常下降得很快，此時可以通過及時傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、細(xì)菌、酵母或真菌污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時，可以通過以下幾種方法解決：

1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度。NaHCO3含量在2.0 g/L到3.7 g/L之間時對應(yīng)的CO2濃度為5~10%；

2) 改用不依賴CO2培養(yǎng)液；

3) 適當(dāng)松開瓶蓋。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25 mM；

4) 在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle's鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks'鹽配制的培養(yǎng)液；

5) 如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用抗生素除菌。

2、細(xì)胞培養(yǎng)基常用幾種重要的添加成份及使用過程中應(yīng)注意的問題

酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過肉眼觀察或通過經(jīng)驗(yàn)來判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測定。酚紅通常對含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會產(chǎn)生明顯影響，也可通過純化技術(shù)去除，但酚紅在無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中可能帶來胞內(nèi)鈉/鉀失衡，影響細(xì)胞生長。

碳酸氫鈉在細(xì)胞培養(yǎng)基中主要是作為緩沖系統(tǒng)，此外還具有調(diào)節(jié)滲透壓的作用。通常產(chǎn)品使用說明中的碳酸氫鈉推薦量是一個標(biāo)準(zhǔn)、安全量，是在科學(xué)的基礎(chǔ)上根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)所得。但是由于不同的細(xì)胞系（株）不同，同一株細(xì)胞適應(yīng)環(huán)境也可能不同（細(xì)胞耐受性不同等），且存在的地域性水質(zhì)差異等，在實(shí)際生產(chǎn)過程中也可稍作改動，但使用者需做相應(yīng)的檢測（理化及細(xì)胞生產(chǎn)試驗(yàn)等）。

HEPES是一種非離子緩沖液，在pH 7.2 ～7.4范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，在高濃度時對一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（0.34g /L）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。其安全濃度范圍是10～25mmol/L。

丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是在沒有葡萄糖的條件下，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。

谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，4 ℃下放置1周可分解50 %，使用中最好單獨(dú)配制，置-20 ℃冰箱中保存，使用前加入細(xì)胞培養(yǎng)液中。