細(xì)胞培養(yǎng)基必須含有充分的營養(yǎng)物質(zhì)，才能滿足新細(xì)胞合成、細(xì)胞代謝等生化反應(yīng)所需要的物質(zhì)和能量。細(xì)胞培養(yǎng)基的主要成份是水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助營養(yǎng)物質(zhì)等。因此，我們在日常的實(shí)驗(yàn)中一定要注意細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌方式及其相關(guān)注意事項(xiàng)。

1、不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)

細(xì)胞培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。

高壓滅菌

某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓滅菌，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏簻缇呐囵B(yǎng)基在121℃、15 psi，15分鐘的條件下完全可達(dá)到滅菌效果及營養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時間延長。

絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因培養(yǎng)液中常含有維生素、蛋白質(zhì)、多肽、生長因子等物質(zhì)，這些物質(zhì)在高溫或射線照射下易發(fā)生變性或失去功能，因而上述液體多采用過濾消毒以除去細(xì)菌?？晒┻^濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為PES、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾除菌是當(dāng)前較為常用及便捷的一種方法，常采用0.2 μm孔徑的濾膜，部分采用0.1 μm孔徑。與高壓過濾方式相比，濾膜具有使用期限且價格較高，但對細(xì)胞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份破壞性較小。

2、 不同細(xì)胞培養(yǎng)基存儲過程中的注意事項(xiàng)

通常液體細(xì)胞培養(yǎng)基避免-20 ℃凍存，因?yàn)榻鈨鰰r可能會有營養(yǎng)成份析出，影響培養(yǎng)效果。正常情況下于2 ~ 8 ℃避光保存，使用前從冰箱取出，放入室溫進(jìn)行平衡。通常的液體培養(yǎng)基有效期是6個月到12個月。液體細(xì)胞培養(yǎng)基盡量避免長期貯存，其中的谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解，如果細(xì)胞生長不良，可考慮檢測培養(yǎng)基中的谷氨酰胺含量確定是否再補(bǔ)加谷氨酰胺。市售商業(yè)化液體細(xì)胞培養(yǎng)基有具體的有效期，對于使用干粉細(xì)胞培養(yǎng)基自行配制成液體以后，也應(yīng)低溫（2 ~ 8 ℃）貯存。除培養(yǎng)基中如谷氨酰胺易降解之外，培養(yǎng)基中的其他成分隨著溫度的升高也可能會發(fā)生降解或是析出。

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