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哺乳動物細胞培養(yǎng)是一個至關重要的工具,通常是細胞生物學家研究工作流程中的初始階段。 無論是科學家自己進行培養(yǎng)還是依靠共享資源實驗室,幾十年來,細胞培養(yǎng)的基本面基本面一直保持不變。 細胞在合成培養(yǎng)基中生長,該培養(yǎng)基可為細胞提供其營養(yǎng)需求。 這些要求至少是氨基酸,維生素,鹽和葡萄糖等能源等組件。 但是,為了支持生長,細胞需要動物血清或其等效物。 血清具有1,000多種不同的成分,包括蛋白質,脂質,碳水化合物,生長因子,酶和其他仍然不確定的成分。 血清具有調節(jié)細胞滲透性的功能,并充當進入細胞的營養(yǎng)和其他分子的載體。 盡管可以使用有效的無血清培養(yǎng)基,但含有動物血清的培養(yǎng)基用于生命科學中的大多數細胞培養(yǎng)應用。 在這里,我們討論為研究選擇血清時要考慮的關鍵因素,以確保您獲得準確,一致的結果。
血清的成分
動物血清是細胞培養(yǎng)培養(yǎng)基中的標準成分,但血清本身只是標準或一致的。
血清從批量到批量差異很大,“均勻”細胞群可能對這些變化極為敏感。 從一個實驗到下一個實驗使用的大量血清之間的差異會影響研究結果。 諸如激素,尿酸,尿素,膽紅素,肌酸和膽固醇之類的成分都是高度變化的,對細胞的后果(例如生長速率變化或不需要分化)的后果。
選擇從樣品開始
在為細胞文化項目選擇血清時,該過程中最重要的部分是測試多個批次,并在整個項目中選擇一個要使用的批次,包括其他機構的任何合作者可以匯總或比較其結果。
艾莉森·基利亞(Alison Killilea)負責加州大學伯克利分校的細胞培養(yǎng)設施。 她說,該設施每年都要求四個不同供應商的樣品。 “我們測試了這些血清的三到四個不同細胞系的生長,確保我們選擇一條主要的細胞系,轉化的細胞系和293T細胞,這是通常用于轉染實驗的系?!?不同的胎牛血清(FBS)通過生長三個不同的細胞系來測試三個星期,以確定當所有血清都以相同的密度鋪路時,哪種血清會產生最一致的細胞數量。
除了確定所測試的特定細胞最有反應的血清外,重要的是要從整個項目中購買足夠的血清。 對于大型研究小組,這可能是一個挑戰(zhàn)。
一些制造商提供了匹配的服務,因此可以購買具有相似性能和屬性的新批次以更換以前的批次。
質量高度可變
制造過程中的許多因素有助于血清產品的質量。 總部位于以色列的生物行業(yè)科學事務副總裁戴維·菲奧倫蒂尼(David Fiorentini)表示,他的公司進行了廣泛的質量控制測試,并根據原籍國區(qū)分了其血清。 “在以色列的主要設施中過濾的所有FBS均由歐洲藥品質量(EDQM)的局認證。 所有血清均在CGMP符合CGMP的設施中進行處理。
生物產業(yè)以多種方式監(jiān)視血清的質量。 公司僅從批準的供應商那里購買原材料,并遵守這些材料的書面規(guī)格。 血清在干凈的房間中加工。 每個生產地塊都是完全可追溯的,QC測試了物理,化學和生物學性能以及不育和不定期試驗測試。
在MTI Globalstem,QC過程的重要部分是在研究人員使用的各種不同細胞類型上測試血清批次。 “對于我們的干細胞客戶來說,這確實是擁有可以養(yǎng)活細胞并使其在文化中增長而不會區(qū)分的血清的重點,” MTI Globalstem營銷總監(jiān)Donna Trollinger說。
研究人員還應注意血清的原籍國,并確保血清驗證是否沒有分枝桿菌和病毒。 原籍國很重要,因為每個國家都有自己的監(jiān)管機構,批準其他血清原籍國。 例如,一些原籍國已獲得歐盟的批準,但未獲得美國農業(yè)部的批準。
加工
血清可以通過熱滅活,伽馬射線,透析和其他方法來處理其特定應用的特性。 加熱血清量是一種常見的過程,用于滅活化補體的蛋白質,這些蛋白質會干擾測定。 但是,熱處理也可能使系統(tǒng)的其他未定義組件失活,因此,除非需要您的特定應用,否則避免熱滅活的血清是一個好主意。
“熱滅活始于1970年代,直到現(xiàn)代過濾系統(tǒng)使其過時。 但是有些人仍然使用這些舊方案并在不知不覺中影響細胞生長速度,因為滅火會破壞生長因素?!?
伽瑪輻照是血清中使用的另一種常見治療方法。 伽瑪照射的主要目的是使病毒失活。 透析一些FBS以去除低分子量成分,或通過色譜處理以去除IgG。
在為細胞培養(yǎng)應用選擇血清時,研究人員的任務具有挑戰(zhàn)性。 有許多因素需要考慮,以及對各種制造商和批次的樣品進行勞動密集型測試。 此外,他們必須考慮針對其應用,原產國和成本的特殊處理需求。 Thermo Fisher Scientific的全球研究血清全球營銷發(fā)展經理Chris Scanlon說,研究人員在為研究選擇血清時傾向于被誤導,“當還有許多其他元素更好的元素時,他們過于重視起源作為質量標記 定義血清質量(即生長,克隆,電鍍)。 他還建議利用其FBS專家團隊直接與客戶合作,以找到合適的血清以滿足他們的研究和預算需求。”
最后,選擇適當的血清以在細胞培養(yǎng)實驗中使用,需要對各種樣品進行動手測試,以查看細胞的反應。 它還需要對文獻進行一些掃描才能了解生長細胞類型的最佳條件(尤其是如果細胞系對您來說是新的),并確定細胞是否需要特定的血清類型或變異。 最后,預期使用的計劃可能是至關重要的,尤其是在進行大規(guī)模或長期實驗的情況下。
【本文標簽】 細胞培養(yǎng) 培養(yǎng)基
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