了解移液不當(dāng)?shù)母鞣N細(xì)微差別是確保準(zhǔn)確性和精密度的最關(guān)鍵要素之一,特別是在人員流動率較高、實(shí)驗(yàn)室工作量不斷增加和測試日益復(fù)雜的情況下。應(yīng)記錄完整的培訓(xùn)方案并包括定期的能力評估,即使這不是監(jiān)管要求。整個實(shí)驗(yàn)室工作人員持續(xù)采用一致的移液技術(shù)可確保測試結(jié)果的一致性。
對于熟練的人來說,正確校準(zhǔn)的移液器是一種準(zhǔn)確且精密的儀器。然而,與任何精密儀器一樣,技術(shù)不當(dāng)會對測試結(jié)果產(chǎn)生負(fù)面影響。
1. 在液體處理步驟之前將移液器吸頭 預(yù)濕 3 次
預(yù)潤濕可增加吸頭內(nèi)的濕度,減少轉(zhuǎn)移樣品的蒸發(fā)。
2. 吸液時保持在半月板下方 2-6 毫米處
預(yù)潤濕時,確保不要將移液器吸頭浸入溶液中太深,以避免液滴粘在吸頭的外表面。
3.在移液器、溶液和空氣之間的溫度平衡下工作
移液器容易受到分配樣品溫度變化的影響。冷液體往往會輸送過量,而熱液體可能會輸送比預(yù)期更少的體積。除非另有說明,否則使用前請留出足夠的時間讓移液器和液體的溫度達(dá)到平衡。
4. 在移液步驟之間使用移液器支架
盡量減少對移液器和吸頭的操作,以避免體溫傳遞到移液器。溫度傳遞使移液器和吸頭內(nèi)的空氣膨脹,從而導(dǎo)致吸入的樣品體積發(fā)生變化。因此,建議在移液步驟之間使用移液器支架。
5. 分配樣品前檢查吸頭
檢查吸頭外表面是否有液滴可以避免移液體積錯誤。如果發(fā)現(xiàn)水滴,請用無絨布仔細(xì)擦拭,避開尖端孔口。
6.了解標(biāo)準(zhǔn)和反向模式移液的使用
對水溶液使用標(biāo)準(zhǔn)模式移液,對粘性溶液使用反向模式移液,可避免因樣品性質(zhì)而產(chǎn)生的移液誤差。
7. 抽吸后持續(xù)暫停
抽吸后,當(dāng)吸頭仍在溶液內(nèi)時,持續(xù)暫停,以使吸頭內(nèi)的液體穩(wěn)定。
8. 將移液器筆直拉出
抽吸后,確保避免吸頭接觸容器表面,并將其筆直拉出。在移取小體積樣品時,表面張力是要避免的特別重要的因素,否則可能會導(dǎo)致樣品體積不一致。
9.使用正確的移液器吸頭
移液器和吸頭之間的不匹配可能會導(dǎo)致移液器和吸頭之間的密封不當(dāng),從而最大限度地減少樣品損失。施加太大的壓力可能會導(dǎo)致?lián)p壞吸頭并改變樣品體積。
10.使用一致的柱塞速度和壓力
緩慢而穩(wěn)定地按下和釋放柱塞,以確保分配體積的一致性。緩慢而小心地操作柱塞可以避免由于移液時空氣柱置換液體而產(chǎn)生的錯誤。
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