流式細(xì)胞術(shù)是基礎(chǔ)研究以及藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)中細(xì)胞分析和基于細(xì)胞的測定的強(qiáng)大工具。 該技術(shù)的應(yīng)用多種多樣，從簡單的細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測定，到復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)染色。 但正是分析大量轉(zhuǎn)錄后v變化的能力，使得流式細(xì)胞術(shù)成為現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可或缺的一部分。
盡管流式細(xì)胞術(shù)首次出現(xiàn)于 20 世紀(jì) 60 年代，并且此后取得了無數(shù)的進(jìn)步，但它仍然被譽(yù)為一項(xiàng)困難的技術(shù)，需要具有深入知識的專業(yè)專家才能成功執(zhí)行。 iQue  ? 先進(jìn)的流式細(xì)胞術(shù)平臺的開發(fā)旨在克服這一問題，使這種強(qiáng)大的技術(shù)重新回到每個實(shí)驗(yàn)室的能力范圍內(nèi)。

本案例研究滿足現(xiàn)代藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)工作流程的需求，探索實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的以下四個關(guān)鍵支柱，以展示加速基于細(xì)胞的檢測工作流程的綜合解決方案將帶來的好處。

1. 重現(xiàn)性
2. 可靠性
3. 優(yōu)化樣品使用
4. 多重分析

iQue  ?  3 是一種先進(jìn)的高通量流式細(xì)胞術(shù)解決方案，旨在加快整個工作流程。 iQue  ? 平臺提供了一種新穎的篩選解決方案，簡化了從實(shí)驗(yàn)設(shè)置和采集到分析和結(jié)果的過程。

專為藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)而設(shè)計(jì)，得益于一系列標(biāo)準(zhǔn)化方案和試劑，它需要最少的分析優(yōu)化，并且系統(tǒng)的專用 iQue Forecyt  ? 軟件可實(shí)時生成 IC50/EC50 曲線、熱圖和圖表分析等數(shù)據(jù)時間。 快速、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)生成對于項(xiàng)目進(jìn)展至關(guān)重要，因此 iQue  ? 旨在通過使用更少材料的更少實(shí)驗(yàn)提供更深入的生物學(xué)見解。 它可以同時測量細(xì)胞特異性參數(shù)（例如表型變化和增殖率），并在單次測定中量化分泌因子，每孔體積低至 5 μL。

重現(xiàn)性
iQue  ? 經(jīng)過精心設(shè)計(jì)，可在重復(fù)過程中生成可靠的數(shù)據(jù)，顯示測定板之間良好的日內(nèi)和日間相關(guān)性（圖 1A 和 1B）。
含有已知量試劑的孔用于測試不同板重復(fù)和測試天數(shù)的再現(xiàn)性。 將四種小鼠抗體同種型 IgG1、IgG2a、IgG2b 和 IgG3 以多種濃度混合，并在 24 個重復(fù)孔中進(jìn)行測量。

使用 iQue ? 小鼠 IgG 類型和滴度測定試劑盒 在同一天運(yùn)行三個板（圖 1A）或在不同的日子測量單個板（圖 1B） 。 對所有樣品的變異性進(jìn)行了分析，相關(guān)性 R2 > 0.99，線性回歸曲線值約為 1，顯示出日內(nèi)和日間測試的出色測定重現(xiàn)性。

優(yōu)化樣品使用
iQue? 的順序采樣和小型化功能允許隨著時間的推移從單個孔中評估多個參數(shù)，從而節(jié)省寶貴的樣品和試劑，并減少實(shí)驗(yàn)變異性。 為了證明這一點(diǎn)，iQue  ? 多重人抗體內(nèi)化試劑盒（一種抗體內(nèi)化測定）運(yùn)行 20 小時，重復(fù)評估多個參數(shù)，包括細(xì)胞活力。 Ramos 細(xì)胞以 1×106 個細(xì)胞/mL 的密度接種在含有兩倍連續(xù)稀釋抗體的 384 孔板中（從 1 mg/mL 開始），并在不同時間點(diǎn)對每個孔進(jìn)行連續(xù)測量。 熱圖（圖 4A）和圖表（圖 4B）提供了每個采樣時間點(diǎn)抗體內(nèi)化程度的數(shù)據(jù)分析，證明了評估多個時間點(diǎn)以檢測內(nèi)化速率較慢的抗體的重要性，如 CD20 所示。 使用 iQue  ?重復(fù)采樣 也非常適合跟蹤隨時間變化的動態(tài)生物變化，例如細(xì)胞激活后細(xì)胞因子分泌的量化。

可靠性
iQue  ? 能夠?yàn)橛脩籼峁┛绮煌瑑x器或操作員的一致數(shù)據(jù)，在使用固定光電倍增管 (PMT) 電壓的運(yùn)行之間提供可靠的操作和顯著的一致性。

多重分析
藥物發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的需求不斷增長的最后一個支柱是 iQue  ? 執(zhí)行多參數(shù)測量以生成更多生物學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)的能力。 憑借經(jīng)過驗(yàn)證的、即用型多重檢測試劑盒，iQue  ? 非常適合處理多個板并提供多個讀數(shù)，無需清洗 |  單次洗滌測定和新穎的數(shù)據(jù)縮減工具可提供準(zhǔn)確且精確的結(jié)果，同時緩解實(shí)驗(yàn)室工作流程中的瓶頸。
iQue  ? 可以同時測量細(xì)胞表型、增殖和凋亡的變化，并結(jié)合分泌蛋白的釋放（例如細(xì)胞因子），為高內(nèi)涵分析帶來新的意義。

本案例研究中提供的示例證明了 iQue  ? 作為高內(nèi)涵、高通量細(xì)胞分析的可靠平臺的適用性。 該系統(tǒng)的開發(fā)考慮了藥物發(fā)現(xiàn)和開發(fā)實(shí)驗(yàn)室的需求，其中快速、可重復(fù)和多重篩選平臺的需求不斷增長。
總之，無論您是發(fā)現(xiàn)新的治療性抗體、開發(fā)特定的檢查點(diǎn)抑制劑還是評估 CAR T 細(xì)胞功能，推動您的研究前進(jìn)都取決于以生物學(xué)相關(guān)、可重復(fù)且具有成本效益的方式快速評估更多樣本的能力。
iQue?  _ 3 是最先進(jìn)的流式細(xì)胞術(shù)平臺，注重從設(shè)置到采集和分析的速度。 它能夠讓您在創(chuàng)紀(jì)錄的時間內(nèi)從樣品到可操作的結(jié)果。 iQue  ?  3 結(jié)合了專利采樣方法，可實(shí)現(xiàn)業(yè)內(nèi)最快的樣品采集，能夠處理 96孔板、384孔板 或 1536 孔板，并通過與任何自動化系統(tǒng)連接實(shí)現(xiàn)連續(xù)板裝載。
它是簡單、可擴(kuò)展的多用戶環(huán)境，具有傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀所不具備的無人值守自動化、全面的分析和可視化工具。