與低容量板（包括 384孔板和較小的板格式）相關(guān)的液體處理挑戰(zhàn)必須格外小心，以防止培養(yǎng)過程中 iCell? 肝細胞 2.0 的過度損失。

為了最大限度地減少 384 孔 2D 培養(yǎng)形式中的細胞損失，我們建議您：

• 以 30,000 個細胞/孔的密度進行平板培養(yǎng)。每個 384 孔板的表面積約為 96孔板的三分之一。 請注意，在一個 iCell 肝細胞 2.0 冷凍管中可以使用 ≥900 萬個活細胞來接種多達 300 個孔。隨著時間的推移，以較低密度鋪板可能會導(dǎo)致培養(yǎng)物惡化。
• 保持電鍍培養(yǎng)基或維護培養(yǎng)基的培養(yǎng)基體積為 40 - 60 μl/孔。
• 根據(jù)我們的用戶指南， 遵循 96 孔板的標準培養(yǎng)基更換時間表。
• 更換培養(yǎng)基時避免接觸每個孔的底部。設(shè)置液體處理器的探頭高度，使探頭尖端不會接觸孔底；如果手動移液，請確保移液器吸頭不會接觸孔底。
• 更換培養(yǎng)基時使用低移液速度。將液體處理器的分配速度設(shè)置為低流速，以防止細胞從孔底部分離； 如果手動移液，則將移液器吸頭接觸孔的一側(cè)，然后沿著孔的一側(cè)緩慢分配。 分配后，在離心機中旋轉(zhuǎn)板，使介質(zhì)到達孔底部。
• 通過去除除 20 μl 之外的所有廢培養(yǎng)基并添加新鮮培養(yǎng)基以彌補體積差異來進行培養(yǎng)基更換。在每個孔中使用 50 μl 培養(yǎng)基的示例中，取出 30 μl（50 μl 減 20 μl）用過的培養(yǎng)基并添加 30 μl 新鮮培養(yǎng)基。
• 避免使用板外邊緣的孔，因為它們?nèi)菀壮霈F(xiàn)蒸發(fā)問題，導(dǎo)致培養(yǎng)物變質(zhì)，特別是培養(yǎng)時間超過 5 天時。我們建議僅使用內(nèi)部 240 個孔來培養(yǎng)細胞，并僅用培養(yǎng)基填充外部兩行和兩列。
• 盡可能減少液體處理步驟。執(zhí)行僅添加步驟而不清洗，以盡量減少細胞破壞，特別是對于經(jīng)過化合物處理的細胞。
• 當(dāng)需要清洗時，進行稀釋而不是 100% 更換培養(yǎng)基。例如，除去除 10 - 20 μl 之外的所有培養(yǎng)基，添加 50 μl 洗滌液，并重復(fù) 2 - 3 次進行稀釋。
• 使用預(yù)涂有 I 型膠原蛋白的組織培養(yǎng)板進行細胞附著。 不要手動涂抹新鮮的膠原蛋白 I 涂層。
• 將板倒置在吸水紙上并離心以倒出介質(zhì)以進行不再需要無菌的終點測定。
• 使用與電鍍介質(zhì)和維護介質(zhì)類似的 RPMI（不含補充劑）代替 PBS 進行清洗，因為 PBS 會加劇分離。