一、準備培養(yǎng)皿
準備瓊脂。 瓊脂是一種用于培養(yǎng)細菌的果凍狀物質(zhì)。 它由一種紅藻制成,為許多不同類型的細菌提供了理想的生長表面。某些類型的瓊脂含有添加的營養(yǎng)物質(zhì)(如羊血等),有助于促進更旺盛的細菌生長。
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本實驗中最容易使用的瓊脂類型是粉末狀的營養(yǎng)瓊脂。您將需要多少瓊脂,但每 10 厘米(3.9 英寸)培養(yǎng)皿所用的瓊脂粉不要少于 1.2 克(? 茶匙)。
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在耐熱盤或碗中,將 1.2 克(? 茶匙)營養(yǎng)瓊脂粉加入 60 毫升(0.25 攝氏度)熱水中。將這些數(shù)量乘以您計劃使用的培養(yǎng)皿數(shù)量。
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將碗或盤子放入微波爐中,讓它開始沸騰 1 分鐘或更長時間,注意確保瓊脂溶液不會沸騰溢出。
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溶液準備好后,瓊脂粉應完全溶解,液體顏色澄清。
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在繼續(xù)之前讓瓊脂溶液冷卻幾分鐘。你不想被燒傷!
準備培養(yǎng)皿。 培養(yǎng)皿是由透明玻璃或塑料制成的小型平底容器。 它們有兩半 - 頂部和底部 - 相互插入。這可以保護內(nèi)容物免受任何不需要的污染空氣的影響,但也可以讓細菌產(chǎn)生的任何氣體逸出。
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培養(yǎng)皿在用于培養(yǎng)細菌前必須徹底滅菌,否則會影響實驗結(jié)果。新購買的培養(yǎng)皿應預先消毒并密封在塑料包裝中。
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從包裝中取出培養(yǎng)皿并將兩半分開。非常小心地將溫熱的瓊脂溶液倒入培養(yǎng)皿的下半部分——剛好足以在培養(yǎng)皿底部形成一層。 在有高火焰的蠟燭或本生燈的情況下工作,以保持較低的污染。
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快速更換培養(yǎng)皿的上半部分,以防止空氣中的細菌污染實驗。將培養(yǎng)皿放在一邊 30 分鐘到 2 小時,直到瓊脂溶液冷卻并變硬(準備就緒后它會像凝固的果凍)。
冷藏培養(yǎng)皿直到可以使用。 如果您不打算立即使用裝滿瓊脂的培養(yǎng)皿,則應將它們存放在冰箱中,直到您準備好繼續(xù)進行實驗。
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將培養(yǎng)皿存放在冰箱中可防止培養(yǎng)皿中的水分蒸發(fā)(細菌需要潮濕的環(huán)境才能生長)。它還可以使瓊脂表面稍微變硬,從而防止在轉(zhuǎn)移細菌樣品時出現(xiàn)任何撕裂或挖痕。
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將培養(yǎng)皿放入冰箱時,應將培養(yǎng)皿倒置。這有助于防止蓋子上的任何冷凝水掉落并破壞生長表面。
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充滿瓊脂的培養(yǎng)皿可在冰箱中保存長達幾個月。當您準備好使用它們時,將它們從冰箱中取出并讓它們達到室溫,然后再放入您的樣品。
二、生長細菌
將細菌引入培養(yǎng)皿中。 一旦瓊脂溶液變硬并且培養(yǎng)皿處于室溫,您就可以開始有趣的部分了——引入細菌。有幾種方法可以做到這一點——通過直接接觸或通過樣本采集。
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直接接觸:
這是指細菌通過直接接觸轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中,即接觸瓊脂。最常見的方法之一是用指尖(洗手之前或之后)輕輕按壓瓊脂表面。 但是,您也可以嘗試將指甲或舊硬幣的表面壓入瓊脂中,甚至將一小撮頭發(fā)或一滴牛奶放入培養(yǎng)皿中。 如果有的話,請使用無菌棉簽。 動用你的想象力!
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樣品采集
:使用這種方法,您可以從幾乎任何表面采集細菌并將其轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中,您只需要一些干凈的棉簽。 只需拿起棉簽并在您能想到的任何表面上輕掃 - 嘴巴內(nèi)部、門把手、計算機鍵盤上的按鍵或遙控器的按鈕 - 然后用它在表面劃線瓊脂(不撕裂)。 這些地方藏有大量細菌,應該會在幾天內(nèi)提供一些有趣(和惡心)的結(jié)果。
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如果愿意,您可以在每個培養(yǎng)皿中放置多個細菌樣本——您所需要做的就是將培養(yǎng)皿分成象限(四分之一),然后在每個象限中涂抹不同的細菌樣本。
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建議您保留培養(yǎng)皿的一個象限沒有細菌樣本以用作對照組。這使您可以知道在引入細菌樣品之前瓊脂是否已被污染。
標記并密封培養(yǎng)皿。 一旦你引入了細菌,你應該蓋上培養(yǎng)皿的蓋子并用一些封口膜或保鮮膜密封。
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確保在每個培養(yǎng)皿上標明其所含細菌的來源,否則您將無法分辨哪個是哪個。您可以使用一些膠帶和記號筆來完成此操作。
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作為額外的預防措施,您可以將每個培養(yǎng)皿放入一個帶拉鏈的袋子中。這將提供額外的保護層,防止可能形成的任何有害細菌菌落,但仍允許您查看培養(yǎng)皿中的內(nèi)容。
將培養(yǎng)皿放在溫暖、黑暗的地方。 將培養(yǎng)皿放在溫暖、黑暗的地方,讓細菌在不受干擾的情況下繁殖數(shù)天。 記得將盤子倒置存放,這樣細菌的生長就不會受到任何水滴的干擾。
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細菌生長的理想溫度在 70 到 98 華氏度(20-37 攝氏度)之間。如有必要,您可以將培養(yǎng)皿放在涼爽的地方,但細菌的生長速度會慢很多。
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讓細菌發(fā)育 4-6 天,因為這將為培養(yǎng)物提供足夠的生長時間。一旦細菌開始生長,您可能會注意到盤子里散發(fā)出一股氣味。
記錄你的結(jié)果。 幾天后,您會發(fā)現(xiàn)每個培養(yǎng)皿內(nèi)都生長著數(shù)量驚人的細菌、霉菌和真菌。
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用筆記本記錄你對每道菜內(nèi)容的觀察,或許可以得出關(guān)于哪些地方細菌最多的結(jié)論。
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如果愿意,您可以使用氈尖標記在培養(yǎng)皿底部的每個菌落周圍畫一個圓圈,從而測量細菌菌落的每日生長情況。幾天后,您應該在每個盤子的底部都有一系列同心環(huán)。 這將幫助您計算和記錄數(shù)據(jù)。
測試抗菌劑的有效性。 這個實驗的一個有趣的變化是在培養(yǎng)皿中加入抗菌劑(洗手液、肥皂等)以測試其有效性。
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將細菌引入培養(yǎng)皿后,用棉簽將一小滴洗手液、消毒皂或家用漂白劑滴到細菌樣本的中心,然后照常繼續(xù)實驗。
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隨著培養(yǎng)皿中細菌的生長,您應該會在放置抗菌劑的位置周圍看到?jīng)]有細菌生長的環(huán)或“光環(huán)”。這被稱為“殺傷區(qū)”(或更準確地說,“抑制區(qū)”)。
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您可以通過比較每個培養(yǎng)皿中殺滅區(qū)的大小來衡量不同抗菌劑的有效性。殺滅區(qū)越寬,抗菌劑越有效。
三、安全處理細菌
采取適當?shù)陌踩A防措施。 在您嘗試處理您的培養(yǎng)皿之前,您首先需要采取適當?shù)陌踩A防措施。
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雖然您培養(yǎng)的大多數(shù)細菌都不會造成危害,但大的細菌菌落可能會帶來更大的風險 - 因此您需要在使用家用漂白劑處理前殺死它們。
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戴上橡膠手套保護您的手免受漂白劑的傷害,戴上塑料護目鏡保護您的眼睛,并戴上圍裙保護您的衣服。
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用橡膠手套蓋住切開的傷口,避免在細菌生長時攝入或吸入細菌。
將漂白劑倒入培養(yǎng)皿中。 打開培養(yǎng)皿,小心地將少量漂白劑倒在細菌菌落上,將培養(yǎng)皿放在水槽上方。 這會破壞細菌。
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小心不要讓任何漂白劑接觸您的皮膚,因為它會灼傷。
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然后將消毒過的培養(yǎng)皿放入自封塑料袋中,并將袋子丟進垃圾桶。