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PCR 和 qPCR 都是用于擴增 DNA 特定片段的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)。兩者之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實時方法,而PCR 不是。
這意味著通過 qPCR,您可以實時監(jiān)控目標(biāo) DNA 的擴增情況。本指南將向您介紹這兩種方法并解釋它們之間的主要區(qū)別。
PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是一種實驗室技術(shù),由 Kary Mullis 在 20 世紀(jì) 80 年代開發(fā),如今用于從少量 DNA 產(chǎn)生大量 DNA。
PCR 通常是其他過程中使用的步驟,例如 DNA 測序、病原體檢測和凝膠電泳。PCR是一種重要的診斷技術(shù),常用于病毒學(xué)、微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、真菌學(xué)和牙科等領(lǐng)域。
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (PCR) 是一種用于制備 DNA 特定片段的多個副本的方法。這個過程從少量模板 DNA 開始,然后通過稱為聚合酶的酶進行復(fù)制。 通過重復(fù)加熱和冷卻循環(huán)可以增加復(fù)制的數(shù)量,這會分離 DNA 鏈,以便它們可以再次復(fù)制。
PCR 的最終產(chǎn)物是目標(biāo) DNA 序列的大量相同副本。然后該產(chǎn)品可用于進一步分析,例如測序或 Southern 印跡。 PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。
定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR 或定量 PCR)與 PCR 非常相似,但它還允許您量化樣品中存在的目標(biāo) DNA 的量。qPCR 涉及在擴增過程中添加與目標(biāo) DNA 結(jié)合的熒光染料或探針。 當(dāng)這些探針被激光激發(fā)時,它們會發(fā)出不同波長的光。
通過測量每個波長發(fā)出的光,您可以確定在擴增開始之前樣品中存在多少目標(biāo) DNA。qPCR 還可用于通過測量熒光隨時間的增加來實時監(jiān)測擴增進度。
逆轉(zhuǎn)錄 PCR (RT-PCR) 是一種 PCR,用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。RT-PCR 通常用于檢測和定量 RNA 病毒,例如 HIV 和丙型肝炎。
要進行 RT-PCR,您首先需要使用逆轉(zhuǎn)錄酶將 mRNA 模板逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA。然后您可以使用 PCR 來擴增您的目標(biāo) cDNA 序列。 RT-PCR 是一種非常靈敏的方法,可用于檢測樣品中極低水平的 RNA 病毒。
qPCR 具有測量基因表達的能力。在基因表達中,當(dāng)讀取一段 DNA 時,就會合成 mRNA,然后使用 mRNA 來生產(chǎn)蛋白質(zhì)。
在逆轉(zhuǎn)錄過程中,逆轉(zhuǎn)錄酶可用于創(chuàng)建互補 DNA (cDNA),這將是所研究的 RNA 的副本。然后對 cDNA 進行 qPCR,以準(zhǔn)確測量產(chǎn)生的量。
RNA 可用于 PCR 和 qPCR,如果 RNA 用于 PCR,則稱為 RT-PCR,如果 RNA 用于 qPCR,則稱為 qRT-PCR。
PCR 和 qPCR 之間的主要區(qū)別在于 qPCR 是實時方法,而 PCR 不是。這意味著通過 qPCR,您可以實時監(jiān)控目標(biāo) DNA 的擴增情況。
兩種方法之間的另一個區(qū)別是 qPCR 需要使用熒光染料或探針,而 PCR 則不需要。這些探針可讓您定量樣品中存在的目標(biāo) DNA 的量。
PCR 是一個相對簡單的過程,可以檢測DNA 是否存在。PCR 應(yīng)用于許多不同的領(lǐng)域,包括法醫(yī)學(xué)、醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)。 它經(jīng)常用于擴增小片段 DNA 以進行測序或其他下游應(yīng)用。
PCR 還可用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。
qPCR 提供測量反應(yīng)速率的實時數(shù)據(jù),提供有關(guān)任何給定時間樣本中存在的 DNA 數(shù)量的 信息,本質(zhì)上,它能夠測量基因表達速率。
在分子生物學(xué)中,這有助于理解蛋白質(zhì)合成,從而有助于理解健康和疾病的生物途徑。實時或 qPCR 可用于檢測基因表達、病原體和 RNA 的存在和數(shù)量,以及驗證 DNA 微陣列結(jié)果和環(huán)境應(yīng)用。
qPCR 具有高通量和更寬的動態(tài)范圍的優(yōu)點,因為它可以在同一孔內(nèi)檢測廣泛的表達水平。由于其多重功能,可以在同一實驗中擴增多個目標(biāo)、高通量和快速結(jié)果,因此運行起來更加經(jīng)濟。
RT-PCR 是 PCR 的一種,用于從 mRNA 模板分子制備 cDNA。RT-PCR 通常用于檢測和定量 RNA 病毒,例如 HIV 和丙型肝炎。
PCR 和 qPCR 都是具有許多不同應(yīng)用的重要方法。
有許多不同類型的設(shè)備可用于 PCR 和 qPCR。最常見的設(shè)備類型是熱循環(huán)儀 ,它用于加熱和冷卻樣品以使 DNA 擴增發(fā)生。
其他常見類型的設(shè)備包括逆轉(zhuǎn)錄酶、熒光染料或探針以及激光器。根據(jù)您的具體應(yīng)用,您可能還需要其他類型的設(shè)備。
PCR 和 qPCR 是許多不同領(lǐng)域中使用的重要方法。通過了解它們之間的主要區(qū)別,您可以為您的特定應(yīng)用選擇最佳方法。
總之,PCR 和 qPCR 都是用于擴增 DNA 特定片段的方法 。
然而,qPCR 是一種實時方法,可讓您實時監(jiān)控目標(biāo) DNA 的擴增情況,而 PCR 則不然。最終,這兩種方法都可用于生成目標(biāo) DNA 序列的多個副本以供進一步分析。
qPCR是核酸擴增、表征、定量和分析的最佳選擇。與熒光染料一起使用,非常適合與光學(xué)技術(shù)一起使用,因此 必須使用 優(yōu)質(zhì)、透明的微孔板 和膠片 。查看我們的 qPCR 產(chǎn)品系列 。
PCR還用于擴增和檢測短 DNA 序列,用于后續(xù)分析,例如凝膠電泳。微孔板 和膠片不需要透明,因為 PCR 不用于光學(xué)應(yīng)用。
然而,建議選擇長期 可靠且耐用的 優(yōu)質(zhì)微孔板。
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